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平板菌落計數法的基本原理和樣品的處理及稀釋
更新時間:2022-07-22   點擊次數:1431次
  平板菌落計數法是將待測樣品經適當稀釋之后,其中的微生物充分分散成單個細胞,取一定量的稀釋樣液接種到平板上,經過培養(yǎng),由每個單細胞生長繁殖而形成肉眼可見的菌落,即一個單菌落應代表原樣品中的一個單細胞。統計菌落數,根據其稀釋倍數和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數。但是,由于待測樣品往往不易*分散成單個細胞,所以,長成的一個單菌落也可來自樣品中的2~3或更多個細胞。因此平板菌落計數的結果往往偏低。為了清楚地闡述平板菌落計數的結果,現在已傾向使用菌落形成單位(colony-formingunits,cfu)而不以絕對菌落數來表示樣品的活菌含量。
  平板菌落計數法樣品的處理和稀釋
  1.操作方法:以無菌操作取檢樣25g(或25ml),放于225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(瓶內預置適當數量的玻璃珠)或滅菌乳缽內,經充分振搖或研磨制成1:10的均勻稀釋液。
  固體檢樣在加入稀釋液后,最好置滅菌均質器中以8000~10000r/min的速度處理1min,制成1:10的均勻稀釋液。
  用1ml滅菌吸管吸取1:10稀釋液1ml,沿管壁徐徐注入含有9ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內,振搖試管混合均勻,制成1:100的稀釋液。
  另取1ml滅菌吸管,按上項操作順序,制10倍遞增稀釋液,如此每遞增稀釋一次即換用1支1ml滅菌吸管。
  2.無菌操作:操作中必須有“無菌操作”的概念,所用玻璃器皿必須是*滅菌的,不得殘留有細菌或抑菌物質。所用剪刀、鑷子等器具也必須進行消毒處理。樣品如果有包裝,應用75%乙醇在包裝開口處擦拭后取樣。
  操作應當在超凈工作臺或經過消毒處理的無菌室進行。瓊脂平板在工作臺暴露15分鐘,每個平板不得超過15個菌落。
  3.采樣的代表性:如系固體樣品,取樣時不應集中一點,宜多采幾個部位。固體樣品必須經過均質或研磨,液體樣品須經過振搖,以獲得均勻稀釋液。

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