浮游植物鑒定中葉綠素a的常規測定方法
更新時間:2018-10-16 文章更新于2018-10-16 點擊次數:2120次
在浮游植物鑒定中,測出的葉綠素a的含量是表征浮游植物生物量的重要指標之一。通過測定浮游植物葉綠素,可掌握水體初級生產力情況,反映水體富營化程度。通常對淡水中葉綠素a的測定方法是采用《水和廢水監測分析方法(第四版)》,即下面所用的規范方法。該方法實驗提取過程操作略顯繁瑣,樣品在分析過程中多次轉移,易造成樣品的缺失,影響浮游植物鑒定結果。在不影響丙酮萃取分光光度法原理的前提下,利用丙酮加熱以提高萃取能力,并對若干個湖泊、湖庫、河流水進行了對比實驗。
在改進的方法中,將步驟2的樣品提取,從“取出干燥后的濾膜放入研缽,加入少量碳酸鎂粉末和2~3mL90%丙酮,充分研磨提取葉綠素a。用離心機4000r/min離心20min。將上清液轉入10mL比色管,用90%丙酮定容為10mL,搖勻。”改成“將干燥后的濾膜放入10mL具塞比色管中,加入少量的碳酸鎂粉末,再加入90%丙酮10mL,旋緊管塞,于50℃恒溫水浴鍋中萃取5min。充分搖勻后,放入4℃冰箱在黑暗中浸漬提取5h。”
通過兩個方法得出的結論可看出,規范法操作步驟略顯繁瑣,在樣品的研磨過程中,本來含量就低的樣品極易損失,不易收集。丙酮易揮發的特性,又使得研磨不能持久太久,造成規范法的測定結果偏低。改進法利用丙酮加熱提升了丙酮的萃取能力,延長浸漬時間,促進藻類細胞破裂,使更多的葉綠素a從細胞中釋放出來。在整個過程中,提取物始終保持在密閉的比色管中,保持了定容的體積,確保了葉綠素a濃度的可靠性。實驗證明,采用丙酮加熱、延長提取時間的方法可以提高對葉綠素a的提取,簡便易操作的特點更適用于大批樣品的數據監測。
在改進的方法中,將步驟2的樣品提取,從“取出干燥后的濾膜放入研缽,加入少量碳酸鎂粉末和2~3mL90%丙酮,充分研磨提取葉綠素a。用離心機4000r/min離心20min。將上清液轉入10mL比色管,用90%丙酮定容為10mL,搖勻。”改成“將干燥后的濾膜放入10mL具塞比色管中,加入少量的碳酸鎂粉末,再加入90%丙酮10mL,旋緊管塞,于50℃恒溫水浴鍋中萃取5min。充分搖勻后,放入4℃冰箱在黑暗中浸漬提取5h。”
通過兩個方法得出的結論可看出,規范法操作步驟略顯繁瑣,在樣品的研磨過程中,本來含量就低的樣品極易損失,不易收集。丙酮易揮發的特性,又使得研磨不能持久太久,造成規范法的測定結果偏低。改進法利用丙酮加熱提升了丙酮的萃取能力,延長浸漬時間,促進藻類細胞破裂,使更多的葉綠素a從細胞中釋放出來。在整個過程中,提取物始終保持在密閉的比色管中,保持了定容的體積,確保了葉綠素a濃度的可靠性。實驗證明,采用丙酮加熱、延長提取時間的方法可以提高對葉綠素a的提取,簡便易操作的特點更適用于大批樣品的數據監測。
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